您在開發(fā)流式聯(lián)檢試劑時(shí)是否遇到過這樣的問題，某個(gè)指標(biāo)，即使在標(biāo)準(zhǔn)品為0時(shí)，PE檢測(cè)通道也有很高的熒光值。這是什么原因了? 根據(jù)我們?cè)趯?shí)踐中的經(jīng)驗(yàn)，這主要是由于該對(duì)抗體中，用于檢測(cè)的熒光抗體與聚苯乙烯微球表面具有比較強(qiáng)的非特異性吸附，從而導(dǎo)致背景信號(hào)較高。而這種高的背景信號(hào)往往嚴(yán)重影響了檢測(cè)的靈敏度以及低值樣本檢測(cè)的準(zhǔn)確度。

   為了降低微球表面吸附，碧芯生物將熒光編碼微球經(jīng)過特殊工藝處理，顯著的減少了對(duì)熒光檢測(cè)抗體的非特異性吸附。這樣的低吸附微球構(gòu)建的檢測(cè)試劑能否帶來(lái)更好的檢測(cè)性能? 事實(shí)勝過雄辯，我們將用實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)證明。在本次實(shí)驗(yàn)中，我們選用了一對(duì)非特異性吸附較強(qiáng)的IL-10的抗體對(duì)作為我們的研究對(duì)象，比較普通熒光編碼微球（源于碧芯生物和其它競(jìng)品公司）與低吸附熒光編碼微球（碧芯生物）構(gòu)建的檢測(cè)試劑在檢測(cè)性能上的差異。為了保證實(shí)驗(yàn)條件一致，我們將各自偶聯(lián)了捕獲抗體的低吸附微球和普通微球混合在一起進(jìn)行檢測(cè)。

  首先，我們先測(cè)定了IL-10濃度為0時(shí)，微球與PE標(biāo)記的IL-10檢測(cè)抗體共孵育、最終用清洗液清洗后，不同微球的熒光信號(hào)值（背景熒光信號(hào)）。如表1所示，Beadstar-mPlex®低吸附熒光編碼微球PE熒光僅為113，相較于沒有與檢測(cè)抗體孵育的微球熒光值105，僅僅增加了8（噪音值）。競(jìng)品公司1和碧芯生物普通熒光編碼微球，其噪音熒光值是Beadstar-mPlex®低吸附磁性熒光編碼微球的250倍以上。其中最讓人驚訝的競(jìng)品公司2的熒光編碼微球，其熒光值達(dá)到了90397，這意味著大量的檢測(cè)熒光抗體被直接吸附到了微球的表面。

                                              表1 在各種微球構(gòu)建的IL10的檢測(cè)體系中，IL10濃度為0時(shí)的信號(hào)值如下表所示

  我們進(jìn)一步制備各種微球構(gòu)建的IL10試劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線。除了做標(biāo)準(zhǔn)曲線以外，也對(duì)血清樣本及血清加標(biāo)樣本進(jìn)行了檢測(cè)（Test001和Test004為同一管血清的重復(fù)樣本；Test002和Test003分別為Test005和Test006血清樣本的加標(biāo)樣本）。首先我們測(cè)試的是碧芯生物Beadstar-mPlex®低吸附磁性熒光編碼微球構(gòu)建的IL-10檢測(cè)試劑。如圖1所示，Beadstar-mPlex®低吸附磁性熒光編碼微球構(gòu)建的IL-10檢測(cè)試劑在對(duì)照品濃度（2.29 pg/mL）仍然能準(zhǔn)確檢出，健康人血清樣本及血清加標(biāo)樣本檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

     圖1 碧芯生物Beadstar-mPlex®低吸附熒光編碼微球構(gòu)建的IL-10檢測(cè)試劑檢測(cè)人血清的研究結(jié)果

  接下來(lái)，我們分別考察了來(lái)自于碧芯生物和其它競(jìng)品公司普通熒光編碼微球構(gòu)建的IL10檢測(cè)試劑的檢測(cè)性能。如圖2所示，采用碧芯生物Beadstar-mPlex®普通熒光編碼微球構(gòu)建的檢測(cè)試劑，標(biāo)準(zhǔn)曲線中對(duì)照品濃度需大于200 pg/mL才能準(zhǔn)確檢出；健康人血清樣本及血清加標(biāo)樣本檢測(cè)結(jié)果為0，結(jié)果不準(zhǔn)確。 圖3所示結(jié)果來(lái)自競(jìng)品公司1的普通熒光微球構(gòu)建的IL-10檢測(cè)方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線中對(duì)照品濃度需大于700 pg/mL才能準(zhǔn)確檢出；健康人血清樣本及血清加標(biāo)樣本檢測(cè)結(jié)果為0，結(jié)果不準(zhǔn)確。

                                     圖2 碧芯生物Beadstar-mPlex®普通磁性熒光編碼微球構(gòu)建的IL-10檢測(cè)試劑檢測(cè)人血清的研究結(jié)果

                                                          圖3 競(jìng)品公司1熒光微球構(gòu)建的IL-10檢測(cè)試劑檢測(cè)人血清的研究結(jié)果

  在前面表1中，非特異性吸附最為嚴(yán)重的競(jìng)品公司2熒光微球構(gòu)建的IL-10檢測(cè)試劑檢測(cè)人血清的研究結(jié)果如圖4所示。來(lái)自于該公司的普通熒光編碼微球做不出標(biāo)準(zhǔn)曲線。檢測(cè)不出人血清樣本及血清加標(biāo)樣本。

                                                         圖4 競(jìng)品公司2熒光微球構(gòu)建的IL-10檢測(cè)試劑檢測(cè)人血清的研究結(jié)果

總結(jié)：從結(jié)果中可以看出，如果采用普通熒光編碼微球，對(duì)于這一對(duì)IL-10抗體有著非常高的背景值，這主要是由于普通微球?qū)?/span>IL-10熒光檢測(cè)抗體的非特異性吸附較高導(dǎo)致的。采用碧芯生物Beadstar-mPlex®低吸附熒光編碼微球的背景值非常低。因而如果想利用這對(duì)抗體做出理想的IL-10檢測(cè)試劑，只有碧芯生物低吸附磁性熒光編碼微球才能實(shí)現(xiàn)。當(dāng)然，更換抗體對(duì)可能會(huì)有更好的結(jié)果，但這種方法不具有普適性，因?yàn)椴皇撬械捻?xiàng)目都有多對(duì)抗體對(duì)可供選擇。因此，選擇低吸附熒光編碼微球來(lái)構(gòu)建檢測(cè)試劑才是解決這一問題的理想方法。

這樣的結(jié)果也提示我們，熒光值高的不一定是檢測(cè)效果好，也有可能是噪音高。